Способ идентификации т-хелперов и т-супрессоров

(я)з 6 01 й 33/53 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ДТОРСКОМУ СИДЕТЕЛСТУ. (71) Киевский медицинский институт имакЪд А.А. Богомольца(56) Ярилин А.А. Чувствительность Т-лимфоцитов человека к теофиллину. Биологическая и клиническая интерпретация. Клеточные факторы регуляции иммуногенеза, Наука, Новосибирск, 1985, с. 24-39, 1,54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ Т-ХЕЛПЕРОВ И Т-СУПРЕССОРОВ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологическим методам исследования, и может быть использовано для Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологическим методам исследования, и может быть использовано в клинической и лабораторной практике для идентификации Т-хелперов и Т-супрессороа.Целью изобретения является ускорение и повышение точности способа.Указанная цель достигается тем, что пробы лимфоцитов параллельно обрабатывают теофиллином и колхицином а конечной концентрации 3 мкг/мл - 7 мкг/мл, после инкубации и отмывания к пробам приливают раствор акридинового оранжевого в разведении 1;30000 и учетом количества Т-хелперов идентификации Т-хелперов и Т-супрессоров при оценке имунного статуса организма в норме и при патологии. Целью изобретения является ускорение и повышение точности, Способ осуществляется путем обработки лимфоцитов параллельно теофиллином и колхицином в конечной концентрации 3 - 7 мкг/мл, инкубации, отмывания с последующей обработкой проб раствором акридиноаого оранжевого в разведении 1;30000, Учет количества Т-хел перов и Т-супрессоров ведут по интенсивности флюоресценции и при активации лимфоцитов колхицином определяЮт Т-хелперы, а при активации лимфоцитов теофиллионом - Т-супрессоры, Способ позволяет оценить физиологическую активность субпопуляий Т-лимфоцитов хелперов, супрессорово активности дезоксирибонуклеопротеид- .ого комплекса. 3 табл,и Т:супрессоров ведут по интенсивности, С флюоресценции проб и при активации, Ч.) ,лимфоцитов колхицином определяют Т- Я хелперы, а при активации лимфоцитов теофиллином - Т-суп рессоры.. аеевйСпособ осуществляют следующим образом.Лимфоциты вравных количествах перед инкубацией с акридиновым оранжевым в ,обрабатывают следующим образом,. Одна проба лимфоцитов служит контролем, другую пробу обрабатывают теофиллином, а третью пробу колхицином в конечной концентрации 3 мкг/млмкг/мл, После инкубации при 370 С и 45 мин пробы отмывают, добавляют акридиновый оранжевый, инку бируют при 4 С 30 мин, после чего центрифугируют и на спектрофлюориметре при А 530 нм (А возбуждения 460 нм) измеряют интенсивность флюоресценции надосадочной жидкости. Количество 5 Т-хелперов и Т-супрессоров определяют по формуле 10 100 -30:5 - 4Т = 100% 20%.5 П р и м е р 2. Все операции с лимфоцитами донора В 2 осуществляют аналогично примеру 1,По формуле вычисляют Т-хелперов и Т-супрессоровгде Ак - количество акридинового оранжевого, связавшегося с лимфоцитами, контроль;Ас - количество акридинового оранжевого, связавшегося с лимфоцитами после обработки их теофиллином;Ах - количество акридинового оранже вого, связавшегося с лимфоцитами после обработки их колхицином.Конкретные примеры осуществления способа.П р.и м е р 1. Из исследуемой крови донора М 1 выделяют на фиколл-уротрасте лимфоциты, которые в равных количествах вносят в 3 пробирки, Лимфоциты первой пробы служат контролем, к ним приливают 2 мл физиологического раствора, Лимфо циты второй пробы обрабатывают теофиллином, лимфоциты третьей пробы - колхицином, в конечной концентрации 3 мкг/мл - 7 мкг/мл, Оптимальной дозой колхицина является концентрация 4 мкг/мл. Общий объем каж дой пообы доводят до 2 мл физиологическим раствором, После инкубации проб при 37 С в течение 45 мин лимфоциты отмывают от реагентов при 1500 об/мин в течение 10 мин и к лимфоцитам в первоначальном 40 объеме 2 мл приливают 2 мл раствора акридинового оранжевого. Пробы инкубируют 30 мин при 4 С, затем центрифугируют и в надосадочной жидкости определяют интенСивность флюоресценции в контрольной и опытных пробах. Разность величин флюоресценции раствора акридинового оранжевого и контрольной пробы, а также опытных проб дает представление о количестве связавшегося акридинового оранжевого.По формуле вычисляют количество Т-хелперов и Т-супрессоров Тх =100% 35,7%7 - 6Тс - 7100 14,4,В работе было обследовано 14 доноров, Результаты, полученные предлагаемым способом, сравнивали с результатами, пол- ученными методами теофиллиновых розеток и с помощью моноклональных антител (фирма "Соое 1 сг", США).Результаты представлены в табл,3.Таким образом, результаты, полученные предлагаемым методом, приближаются к результатам, которые были получены методом моноклональных антител, так как между ними не было достоверных различий. Не было достоверных различий и в количестве Т-супрессоров, определенных методом теофиллиновых РОК. Однако в количестве Т-хелперов такие различия имели место (р 0,01), что указывает на повышение точности результатов.Формула изобретения Способ идентификации Т-хелперов и Т-супрессоров, включающий обработку лимфоцитов теофиллином путем инкубации, отмывания с последующим учетом количества Т-хелперов и Т-супрессоров, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью ускорения и повышения точности способа, параллельно пробу лимфоцитов обрабатывают колхицином в конечной концентрации 3 мкг/мл - 7 мкг/мл, затем раствором акридинового оранжевого в разведении 1:30000 и учет количества Т-хелперов и Т-супрессоров ведут по интенсивности флюоресценции. и при активации лимфоцитов колхицином определяют Т-хелперы, а при активации лимфоцитов теофиллином - Т-супрессоры.1709221 Таблица 1 Табл Т цаРазличия достоверн оставитель Б. Мануйлоехред М.Моргентал Редактор Ю. С р Н, Ревск Ко Заказ 422 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открыти113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 и ГКНТ СССР Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101

Заявка

КИЕВСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ ИМ. АКАД. А. А. БОГОМОЛЬЦА

ГАРКАВАЯ ЕКАТЕРИНА ГРИГОРЬЕВНА, ДЫШЛОВОЙ ВИКТОР ДЕМЬЯНОВИЧ, ЯНУШЕВИЧ СЕРГЕЙ ВАЛЕНТИНОВИЧ, ДАНОВА ИРИНА ВЛАДИСЛАВОВНА, БОРДОНОС ВЛАДИМИР ГЕРАСИМОВИЧ

МПК / Метки

Код ссылки

<a href="https://patents.su/3-1709221-sposob-identifikacii-t-khelperov-i-t-supressorov.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ идентификации т-хелперов и т-супрессоров</a>

Номер патента: 1601581

. характеризующий соотношение между Т-хелперами и супрессорами, при дифференциальной диагностике реакции отторжения почечного трансплантата и инфекционных осложнений может служить прогностическим, критерием назначаемой терапии,П р и м е р 1. Больному Б-к 21,04.84 г,была осуществлена пересадка трупной почки, Через 3 сут после операции состояние больного ухудшилось. Наблюдалось снижение суточного диуреза, повышение температуры до 38 С. Содержание креатинина и мочевины составило 0,128 ммоль/л и 15,5 ммоль/л соответственно, Подозрение на острый криз отторжения. Соотношение Тх,Тс составляло 2,1. Больному был назначен курс массивной иммуносупрессивной терапии (метипред 0,5 г на 1 кг массы тела) в течение 3 дн. Состояние больного.

Номер патента: 1001898

. (самопроизвольный)гидролиз субстрата.Удельную активность ткани рассчитывали по формуле:где А - удельная активность, Е/мп,С - концентрация ткани в гомогенате, мг/мп.по полученным данным измерения .40скорости гидролиэа при различных концентрациях стандартных субстратовстроят график Субстратной специфичности (градин 91) и находят Кщ, Чопф Ч отн (т абл. 91),Изучение морфологических признаков и биохимии позволили сделать вывод относительно того, что выловленный кальмар является новозеландским, и р и м е р е 2. уточняли видовую 50принадлежность выловленного кальмарас помощью изучения свойств холииэстеразы по методике, описанной в примере 91.морфологические и биохилеческие 55признаки свидетельствуют о том, чтоэтот кальмар относится к другому.

Номер патента: 1142079

. исходной ткани - к0,5 мл буфера добавляли 0,5 мл Н Ои 0,5 мл гомогената, третья (рабочая) - к 0,5 мл буфера добавляли 50,5 мл гомогената, Активность измеряли при концентрации субстрата 3 10 М,Начальную скорость гидролиэа Чрассчитывали по формуле; 4 содержание Р мк моль Ро 20,5 31ч мл 4 - число,. которое показывает какуючасть от общей смеси брали на фотометрирование после центрифугировании 4 (0,5 мл из 2 млсмеси); где содержание Р------ - количество фосфора31 фнеорганического,мк моль, образующе-гося в процессеФерментативной реакции (рабочая проба) за вычетом суммы количества Р 55первого и второгоконтроля;2 - время инкубации,ч;Пробы инкубировали 15 мин при 30 в термостате, а затем через равные промежутки времени (1 мин) в первый контроль и.

Номер патента: 1800310

. 0,1 мл насыщенного раствора перманга ната калия (4,48 г 1 см ). Данное количествораствора обеспечивает полное смачивание всей поверхности фильтра, который при укаэанном обьеме вводимого раствора не содержит свободной (гравитационной) влаги, 25 т.е. раствор не стекает с фильтра по стенкампробки. Для обработки фильтра использован насыщенный раствор пермангэната калия, Избыток этого реагентэ на фильтре не влияет на точность определения мышьяка и 30 в тоже время обеспечивает полное окисле ние эрсина и поглощение продуктов окисления на рабочей поверхности фильтра.Поглощение мышьяка происходит в начале процесса эа счет взаимодействия арси на с перманганатом калия и диоксидоммарганца, последний образуется за счет взаимодействия.

Номер патента: 1702316

. Подсчитывают розеткообразующие лимфоциты випробах (не менее 200 клеток в каждом мазке), Выявлено роэеткообразующих лимфоцитов впробе - 58, во- 104. Подсчет Т-супрессоров проводят по разности между процентом розеткообразующих лимфоцитов воипробах, т.е, (104/200) 100- (58/200)100 = 23 ( ), Одновременно подсчитывают количество гранул сукцинатдегидрогеназы в лимфоцитахи .проб. Получены данные: впробе - 96, вопробе - 82. Вычисляют супрессорную активность Тлимфоцитов по формулеСА = ДАт/(ДА (1 - Тс/100) = 96/82 х х 1 - 23/100) = 1,5.Делают заключение в нормальной супрессорной активности Т-лимфоцитов, Активность супрессоров параллельно определяют в течение 7 сут, Индекс супрессии составил 36,5 , что также свидетельствует о нормальной.