ГОСТ Р 51129-98 Соки фруктовые и овощные. Метод определения лимонной кислоты
ОКС 67.080*ОКСТУ 9109_______________* В указателе "Национальные стандарты" 2005 г. ОКС 67.160.20. Здесь и далее. - Примечание изготовителя базы данных.
Дата введения 1998-07-01
1 РАЗРАБОТАН Московской государственной академией пищевых производств, Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности
ВНЕСЕН Техническим комитетом ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"
2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 19 января 1998 г. N 7
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июль 2010 г.
1 Область применения
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодержащие напитки и устанавливает метод определения лимонной кислоты в виде свободной кислоты или соли.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 3652-69 Реактивы. Кислота лимонная моногидрат и безводная. Технические условия
ГОСТ 3769-78 Реактивы. Аммоний сернокислый. Технические условия
ГОСТ 4201-79 Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия
ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 4529-78 Реактивы. Цинк хлористый. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб
ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
3 Определения и сокращения
3.1 В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением:
массовая концентрация лимонной кислоты во фруктовых и овощных соках, нектарах и сокосодержащих напитках: Массовая концентрация лимонной кислоты, определенная в соответствии с методикой, установленной настоящим стандартом, выраженная в мг/дм
3.2 В настоящем стандарте применяют следующие сокращения:
ЦЛ - цитратлиаза ЕС 4.1.3.6 [1];
МДГ - малатдегидрогеназа ЕС 1.1.1.37 [1];
ЛДГ - лактатдегидрогеназа ЕС 1.1.1.27 [1];
НАД - никотинамидадениндинуклеотид, окисленная форма;
НАДН - никотинамидадениндинуклеотид, восстановленная форма;
Е - стандартная единица, определяет количество (активность) фермента, которое служит катализатором при 25 °С для превращения 1 мкмоля вещества в минуту.
4 Сущность метода
Метод основан на ферментативном преобразовании иона цитрата в оксалоацетат с помощью ЦЛ, затем в пируват, восстановлении их с помощью НАДН в присутствии МДГ и ЛДГ, спектрофотометрическом измерении израсходованного НАДН, эквивалентного количеству лимонной кислоты.
В ходе анализа при активной кислотности 7,8 pH протекают следующие ферментативные реакции:
5 Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
Спектрофотометр, позволяющий проводить исследования при длине волны 340 нм, или фотометр фотоэлектрический шириной спектральной полосы не более 10 нм и допустимой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1%, или спектрофотометр на ртутной лампе, позволяющий проводить измерения при длинах волн 365 или 334 нм.
Кюветы из оптического стекла или полистироловые рабочей длиной 10 мм.
Иономер или pH-метр погрешностью измерения не более 0,05 pH.
Электрод для измерения pH стеклянный.
Электрод сравнения (каломельный).
Пипетка по ГОСТ 29227 типа 3, исполнения 1, 1-го класса точности, вместимостью 1 и 10 см Цилиндр по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см )=5 моль/дм )=800 мг/дм )=3,2 моль/дм )=400 мг/дм Отбор проб - по ГОСТ 26313, подготовка их к испытанию - по ГОСТ 26671.
6.1 Подготовка к анализу фруктовых и овощных соков, нектаров и сокосодержащих напитков
При высоком содержании лимонной кислоты в пробе продукта ее разводят водой до массовой концентрации лимонной кислоты от 20 до 40 мг/дм 6.2 Подготовка к испытанию концентратов фруктовых и овощных соков, нектаров и сокосодержащих напитков
Концентрат разводят водой до содержания сухих веществ по рецептуре натурального сока, нектара или сокосодержащего напитка. При необходимости пробу разводят повторно в соответствии с 6.1.
7 Подготовка к испытанию
7.1 Приготовление буферного раствора активной кислотностью 7,8 pH
7,13 г глицилглицина растворяют в 70 см 7.2 Приготовление раствора НАДН
30 мг динатриевой соли НАДН и 60 мг двууглекислого натрия растворяют в 6 см 7.3 Приготовление суспензии МДГ/ЛДГ
0,1 см 7.4 Приготовление раствора ЦЛ
168 мг лиофилизата цитратлиазы растворяют в 1 см
8.1 Проведение ферментативного определения лимонной кислоты
Испытание проводят при температуре от 20 °С до 25 °С. Допускается проведение анализа при постоянной выбранной температуре в интервале от 25 °С до 37 °С.
Для дозирования исследуемой пробы и растворов используют пипетки с делениями или пипеточные дозаторы. Растворы ферментов, коферментов и буфера вносят соответствующими пипеточными дозаторами.
Ферментативное определение лимонной кислоты может быть проведено также с использованием имеющихся в продаже специальных наборов реактивов.
8.1.1 Приготовление пробы
При высоких значениях начальной оптической плотности (более 1,000) готовят новую пробу, используя менее концентрированный раствор НАДН. Рекомендуется также уменьшить объем раствора исследуемой пробы в кювете, компенсируя снижение общего объема в кювете увеличением объема воды.
Если массовая концентрация лимонной кислоты в растворе исследуемой пробы менее 20 мг/дм 8.1.2 Реакция с ферментом и количественный анализ
К подготовленному в кювете по 8.1.1 раствору добавляют 0,02 см раствора относительно воздуха. Окончание реакции проверяют путем повторного считывания показаний через 2 мин.
8.2 Контрольное испытание
9 Выражение результатов
где - фактор разведения пробы, рассчитываемый как отношение объема разведенной пробы к объему, взятому для разведения;
где Достоверность полученных результатов контролируют с помощью стандартного раствора лимонной кислоты массовой концентрации не более 400 мг/дм В отчете об испытании должны быть указаны:
- обозначение настоящего стандарта;
- дата и способ отбора проб (если это возможно);
- дата доставки образца;
- дата проведения анализа;
- обнаруженные в ходе исследования особенности;
- все рабочие условия, не установленные данным стандартом или касающиеся как необязательных, так и любых других подробностей, которые могут повлиять на конечный результат.
В отчете должны быть указаны все детали, необходимые для полной идентификации пробы.
ПРИЛОЖЕНИЕ А (справочное). Библиография
ПРИЛОЖЕНИЕ А (справочное)
[1] Номенклатура ферментов. Рекомендации Международного биохимического союза по номенклатуре и классификации ферментов, а также единицам ферментов и символам кинетики ферментативных реакций. М. 1979
_______________________________________________________________________________________УДК 664.863.001.4:006.354 ОКС 67.080 Н59 ОКСТУ 9109
Ключевые слова: продукт питания, напиток, фруктовые и овощные соки, ферментативный анализ, определение концетрации, лимонная кислота, спектрофотометрия_______________________________________________________________________________________